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蟾蜍化学成分及抗肿瘤作用研究进展
孙逸龙;胡雨荷;李姗;孙永康;徐方飚;宋研博;吴易俊;韩瑾;王新志;蟾蜍是一种传统名贵中药材，具有解毒散结、行水消胀、拔疔消肿等功效，现代多用于治疗各类肿瘤疾病。药理研究表明蟾蜍二烯内酯类、吲哚生物碱类、甾醇类、多肽类为蟾蜍中主要的抗肿瘤成分，可通过调节PI3K/AKT、Wnt/β-catenin、NF-κB、STAT3/p-STAT3等信号通路，以诱导肿瘤细胞自噬与凋亡、破坏肿瘤细胞分裂进程、破坏相关线粒体结构、抑制肿瘤细胞中的糖酵解反应、抑制肿瘤细胞上皮间质转化、逆转肿瘤细胞多药耐药等多种途径发挥抗肿瘤作用。蟾蜍及其提取物对脑神经胶质瘤、鼻咽癌、人下咽鳞状细胞癌等头颈部肿瘤，肺癌，肝癌、食管癌、胰腺癌、结直肠癌等消化道肿瘤，子宫内膜癌、宫颈癌、乳腺癌等生殖系统肿瘤均有明显的抑制作用，具有缩小肿块、减轻放化疗副反应、提高机体免疫力、预防术后肿瘤复发与转移、减轻癌痛、提高患者生存质量等治疗优势。本文旨在论述蟾蜍及其提取物的主要抗肿瘤成分，以及其治疗多系统恶性肿瘤与相关并发症的作用机制及疗效，为蟾蜍临床应用及未来研究发展方向提供新思路。
基于网络药理学和实验验证探究宣白承气汤加味治疗急性肺损伤的作用机制
马鸣;宋鹏鹏;任权娜;汪坤;目的：基于网络药理学和动物实验探讨宣白承气汤加味(XBJW)减少炎症反应治疗急性肺损伤大鼠的作用机制。方法：通过网络药理学获得XBJW调控ALI的潜在靶点及信号通路，并将核心成分和核心靶点进行分子对接。随机将60只SPF级Wistar大鼠随机分为CON组、脂多糖(LPS，7.5 mg·kg-1)组、地塞米松(DEX，3.5 mg·kg-1)组、XBJW高、中、低剂量组(14.74 g·kg-1，7.37 g·kg-1，3.69 g·kg-1)。酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠肺组织IL-17、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎症因子水平。蛋白免疫印迹(Western blot)法检测大鼠肺组织中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路相关蛋白表达。结果：网络药理学显示，共得到XBJW治疗ALI的化合物128个，作用靶点252个，ALI疾病靶点2 138个，“成分-疾病”交集靶点172个，主要活性成分为有效成分主要为槲皮素、木犀草素、山奈酚、β-谷甾醇，7-甲氧基-2-甲基异黄酮以及2-[(3R)-8，8-二甲基-3，4-二氢-2H-吡喃[6，5-f]色烯-3-基]-5-甲氧基苯酚等，核心靶点主要有丝氨酸和苏氨酸激酶AKT(AKT1)、TNF、IL6、IL1β、血管内皮生长因子A (VEGFA) 、表皮生长因子受体(EGFR)等，主要涉及晚期糖基化终产物受体(AGE-RAGE)信号通路、IL-17信号通路等，VEGFA、AKT1、EGFR、TNF同β-谷甾醇以及2-[(3R)-8，8-二甲基-3，4-二氢-2H-吡喃[6，5-f]色烯-3-基]-5-甲氧基苯酚分子对接结合活性最好均小于-5.0 kJ·mol-1。动物实验显示，与LPS组比较，各给药组肺组织中IL-17、IL-6、TNF-α含量均显著下降，同时，肺组织IL-17、TNF-α和磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)蛋白表达明显降低。结论：上述研究表明，XBJW能通过多成分、多靶点及多途径发挥治疗ALI的作用。
UPLC-Q-TOF-MS/MS结合薄层色谱法分析寒喘祖帕颗粒化学成分
马雪红;李乔乔;刘睿婷;李新霞;应用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS/MS）技术建立高效、全面分析寒喘祖帕颗粒化学成分的方法，对寒喘祖帕颗粒中化学成分进行系统分析，结合对照品的质谱特征，UNIFY软件和Pub-chem数据库比对进行鉴定。在寒喘祖帕颗粒中共鉴定出113个化合物，其中包括47个黄酮类、13个五环三萜类、12个有机酸类、9个甾体皂苷类、5个苯甲酸类、4个木脂素类及3个生物碱类等。通过各成分的归类及药材归属，鉴别出8种药材中的特征化合物，明确了寒喘祖帕颗粒制剂中的化学成分；同时采用“一测多评”薄层微乳方法，以已知单味药材来定位复方制剂中的多种未知成分，同时进行多组分质量控制，为寒喘祖帕颗粒及处方中各药材进一步的质量控制提供了科学依据。
基于内质网应激探讨山奈酚抑制前列腺癌PC-3细胞增殖与迁移的机制研究
邵余典;袁星星;杨小芳;杨柳欣;目的：观察山奈酚对内质网应激介导的细胞增殖与迁移的影响，从而阐明其治疗前列腺癌的分子机制。方法：人前列腺癌PC3细胞分为实验分为空白组、山奈酚低/高剂量组（30/60μg/mL）及si-PERK基因干预组（含空载对照）。采用CCK8实验和流式细胞术观察各组细胞活性及细胞周期分布水平；利用Transwell实验检测细胞迁移水平；Westernblot和RT-qPCR分析增殖、细胞黏附和PERK/eIF2α/ATF4/CHOP通路中关键蛋白的表达。结果：与空白组相比，山奈酚组G0/G1期分布比例显著增加，S期细胞比例、细胞活性和细胞迁移的数量显著降低，E-cadherin、PERK、ATF4、CHOP蛋白与mRNA的表达和p-eIF2α/eIF2α的比值显著上调，p-Rb/Rb的比值和CyclinD1、N-cadherin蛋白的表达显著下调，差异均具有统计学意义（P＜0.01）。通过si-PERK基因干预实验证实，PERK通路敲除可逆转山奈酚对细胞增殖和迁移的抑制作用，si-PERK组与si-PERK+山奈酚组间无显著变化，差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论：山奈酚通过特异性激活PERK-eIF2α-ATF4-CHOP信号轴诱导持续性内质网应激，进而抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖与迁移能力。
双硫死亡分子机制及其在慢性阻塞性肺疾病中的治疗潜力
莫濡冰;冼少静;朱轶轲;张蕾;许文亚;蔡兴俊;双硫死亡（Disulfidptosis）是近年来发现的一种新型细胞程序性死亡方式，其机制是细胞内二硫键积累所引发的细胞骨架损伤和程序性死亡。研究表明，双硫死亡与氧化应激、代谢紊乱及蛋白质稳态失衡密切相关，在多种疾病中发挥重要作用。慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）是一种以持续性气流受限和慢性炎症为特征的呼吸系统疾病，其发病机制涉及氧化应激增强、蛋白酶-抗蛋白酶失衡及细胞死亡异常，导致肺泡结构破坏和肺功能进行性下降。COPD的氧化应激微环境与双硫死亡发生条件部分重叠，且其肺组织中双硫死亡相关基因表达异常。本文综述了双硫死亡的分子机制，探讨其与COPD的关系，并分析双硫死亡在COPD治疗中的潜在价值。此外，本文还讨论了目前研究的局限性及未来方向，为开发新型COPD治疗策略提供理论依据。
基于网络毒理学和4D-DIA蛋白质组学探讨奥沙利铂化疗致树鼩药物性脂肪肝疾病的分子机制
谭兴龙;陈文德;易飞;归春龙;陆玉蕾;林有智;目的：基于网络毒理学和4D-DIA蛋白质组学探讨奥沙利铂（OXA）化疗致树鼩药物诱导性脂肪肝疾病（DIFLD）的分子机制。方法：从公共数据库收集OXA潜在毒性靶点，使用“非酒精性脂肪肝”及DIFLD为关键词检索疾病靶点，韦恩图分析确定OXA化疗致DIFLD交集靶点。构建蛋白互作网络后，采用R语言函数包进行GO和KEGG通路富集分析并筛选关键靶点。健康成年雄性树鼩随机分为对照组和OXA化疗组，并腹腔注射OXA建立DIFLD树鼩模型。H&E和油红O染色评估肝脏病理，检测肝脏脂质及氧化应激指标评估化疗肝毒性。肝脏组织行蛋白质组学分析，并对差异蛋白进行GO和KEGG通路富集分析，最后整合结果寻找共同作用通路。结果：生物信息学分析显示，OXA化疗致DIFLD的核心靶点包括IL6、TP53、TNF、STAT3和AKT1等，KEGG通路主要富集于PI3K-Akt、MAPK、AMPK及胰岛素抵抗等信号通路。OXA化疗组树鼩肝脏脂质沉积（TG、CHO及LDL）和氧化应激损伤（MDA、SOD、CAT及GSH）较对照组均显著加重（P<0.05），H&E和油红O染色结果显示肝细胞脂质蓄积明显增加。OXA化疗致DIFLD的GO富集分析揭示细胞生长、能量代谢、脂质代谢及氧化应激等生物学功能的串扰，KEGG信号通路主要富集在三羧酸循环、胰岛素抵抗及AMPK信号通路等。结论：OXA化疗引起DIFLD的肝损伤效应，揭示其可能通过调控细胞生长、能量代谢、胰岛素抵抗、脂质代谢及AMPK信号通路等多条通路促进DIFLD进展，表明OXA化疗致DIFLD可能涉及多靶点和多信号通路的协同损伤作用。
香青兰总黄酮调控小胶质细胞极化改善血管性痴呆模型大鼠认知功能障碍
岳永生;杨燕梅;王丽影;闫旭升;贾建新;杨占君;目的：探讨香青兰总黄酮（total flavonoids of Dracocephalum moldavica L.，TFDM）对血管性痴呆（vascular dementia，VaD）模型大鼠认知功能的影响及机制。方法：采用改良双侧颈总动脉结扎法构建VaD模型，70只雄性8月龄Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组、TFDM低剂量、中剂量、高剂量组、多奈哌齐组。TFDM灌胃给药30 d后，Morris水迷宫实验、旷场实验评价大鼠行为学表现；尼氏染色观察海马CA1区神经元形态变化；免疫荧光染色检测海马组织中CD86/ Iba-1、CD206/Iba-1的表达水平；ELISA检测海马组织中TNF-α、IL-1β等的水平；Western blot检测海马组织中P-JAK2、JAK2、P-STAT3、STAT3、iNOS及Arginase-1的蛋白表达水平。结果: 与模型组相比，TFDM组和多奈哌齐组的大鼠潜伏期显著降低，且目标象限时间百分比显著增加，海马组织P-JAK2/JAK2比值、P-STAT3/STAT3比值、iNOS蛋白表达显著降低，Arginase-1蛋白表达显著升高（P<0.05）。结论: TFDM可以下调VaD模型大鼠中P-JAK2、JAK2、P-STAT3、STAT3和iNOS的表达，促进M1型小胶质细胞向M2型转化，并减少小胶质细胞中的炎症因子，从而改善认知功能障碍。
基于网络药理学和实验验证探究蒙药扎冲十三味丸抗血管性痴呆的作用机制
刘益;马丽;冯思迦;刘婷婷;胡少男;目的：探究扎冲十三味丸(Zhachong Shisanwei Pill，ZSP)治疗血管性痴呆(vascular dementia，VaD)的潜在作用机制。方法：采用双侧颈总动脉永久性结扎术建立大鼠VaD模型，随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组(10 mg·kg-1·d-1)、ZSP低剂量组(160 mg·kg-1·d-1)、和ZSP高剂量组(320 mg·kg-1·d-1)，每组8只。给药4周后，通过Morris水迷宫实验评价大鼠认知功能，H&E染色观察脑组织病理形态，Western blot检测海马体凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、p53、cleaved caspase-3、cleaved PARP表达。基于前期鉴定的ZSP在VaD大鼠吸收入血原型成分，结合网络药理学构建成分、疾病交集靶点的蛋白互作网络以筛选核心靶点，并进行GO和KEGG富集分析预测作用机制。进一步构建“成分-靶点-通路”网络筛选关键成分，并通过分子对接、免疫组化染色、Western blot和ELISA实验验证潜在机制。结果：ZSP可显著提高VaD大鼠学习、记忆能力(P<0.05)，减轻神经元排列紊乱、细胞核固缩，下调海马体Bax/Bcl-2、p53、cleaved caspase-3及cleaved PARP表达(P<0.05)。网络药理学筛选ZSP抗VaD核心靶点60个，GO分析提示ZSP可能通过调控小胶质细胞激活、炎症反应等生物过程发挥作用，KEGG富集NLR信号、Akt信号、NF-κB信号等通路。“成分-靶点-通路”网络筛选去氢木香烃内酯、α-细辛醚等22个关键成分，分子对接显示其与富集上述信号通路的靶点有较好的结合活性。体内实验表明，ZSP可显著抑制VaD大鼠海马体IBA-1、iNOS、TNF-α、IL-1β、IL-6、NLRP3和cleaved caspase-1蛋白表达(P<0.05)，降低p-AKT/AKT比值及细胞核NF-κB活性(P<0.05)。结论：ZSP可有效改善VaD大鼠认知功能，其机制可能与抑制NLRP3炎性小体和AKT/NF-κB信号通路，减轻神经炎症损伤有关。
HDAC4低表达抑制线粒体呼吸促进MAFLD的机制研究
岳仁超;黄昶煜东;许永劼;李程程;张漪祎;朱丽英;潘卫;目的：探究代谢相关脂肪性肝病（MAFLD）中组蛋白去乙酰化酶4（HDAC4）下调通过调控线粒体呼吸进而介导脂滴蓄积的机制。方法：通过GEO数据库比较人肝组织中HDAC4 mRNA的表达水平；将18只6周龄、220～230 g SD雄性大鼠随机分为正常饲料（NC）组与高脂高糖饲料（HFD）组，构建体内代谢相关脂肪性肝病（MAFLD）模型，H&E染色观察大鼠肝组织病变；Western blotting、RT-qPCR及免疫组化实验检测大鼠肝组织HDAC4表达水平；体外使用不同浓度游离脂肪酸（FFA）和高糖（HG）诱导AML12细胞构建高脂高糖细胞模型，利用Western blotting检测HDAC4、CPT1A、ACOX1表达水平；进一步转染HDAC4过表达质粒（OEHDAC4组）或空载质粒（OENC组），结合BODIPY染色、JC-1染色及Western blotting探究过表达HDAC4能否通过增强线粒体呼吸从而改善FFA及HG诱导的肝细胞脂滴蓄积。结果：GEO数据库分析显示，人脂肪肝组织中HDAC4的mRNA表达水平低于健康肝组织（P<0.05）；体内外成功构建MAFLD模型；H&E结果显示，与对照组相比，HFD组肝细胞胞浆内出现大小不等的脂滴空泡；免疫组化结果显示，HFD组大鼠肝组织中HDAC4的阳性面积明显低于NC组（P<0.0001）；Western blotting及RT-qPCR结果显示HDAC4表达显著降低（P<0.001），同时伴随着脂肪酸β-氧化的两个关键酶CPT1A（P<0.05）、ACOX1（P<0.001）的蛋白表达降低；在AML12高脂高糖细胞模型中，随FFA+HG浓度升高，HDAC4、CPT1A、ACOX1呈梯度下降(P<0.05)；过表达HDAC4后，JC-1结果表明OEHDAC4组线粒体膜电位红绿光比值较OENC组显著降低（P<0.0001），BODIPY染色、Western blotting、RT-qPCR结果显示过表达HDAC4可增高CPT1A、ACOX1的表达(P<0.0001)，并减少高脂高糖诱导肝细胞的脂滴蓄积。结论：HDAC4在MAFLD组织和细胞中表达均下调，而过表达HDAC4可能通过上调CPT1A、ACOX1蛋白表达水平，改善高脂高糖诱导的AML12细胞模型脂滴蓄积。
骨痹通消颗粒调控Wnt/β-catenin/PPARγ信号通路治疗激素性股骨头坏死的实验研究
薛松;周正新;朱磊;方祥;陈家康;韩士鼎;徐寰;目的：探究骨痹通消颗粒对地塞米松（Dex）环境下人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）功能的影响。方法：获取激素性股骨头坏死（SANFH）、股骨颈骨折（FNF）患者的股骨头和骨髓组织，对骨组织进行苏木精-伊红染色观察组织病理学情况，Western blot检测骨组织中Wnt家族成员3a（Wnt3a）、β-连环受体（β-catenin）、Runt相关转录因子2（Runx2）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）和CCAAT增强子结合蛋白α（C/EBPα）蛋白的表达水平；体外分离培养原代细胞，Dex诱导细胞损伤后使用骨痹通消颗粒含药血清干预培养，CCK-8检测含药血清对hBMSCs增殖的影响，油红O、茜素红染色，RT-qPCR和Western blot检测含药血清干预后，hBMSCs骨脂分化情况以及通路相关蛋白表达水平。结果：组织病理学染色可见SANFH组坏死区内骨小梁排列紊乱、狭窄及断裂情况明显，骨髓腔内细胞种类减少，出现脂肪浸润的趋势；Western blot结果显示PPARγ、C/EBPα蛋白在SANFH组中的表达较FNF组明显升高，Wnt3a、β-catenin、Runx2等蛋白则出现相反的情况（P<0.05）；在激素环境下，hBMSCs活力受到影响，一定浓度范围内的骨痹通消颗粒含药血清可以逆转由Dex造成的增殖抑制，其中尤以5%组作用48 h时最为明显（P<0.01）；与模型组或抑制剂组比，5%含药血清作用后可明显增加胞质中钙盐沉积处的矿化结节进而减少脂滴着色，同时上调Wnt3a、β-catenin、ALP、Runx2 mRNA和下调PPARγ、C/EBPα mRNA表达水平（P<0.05）。此外，含药血清干预后，还可显著提高通路蛋白Wnt3a、β-catenin和Runx2的表达水平，降低PPARγ、C/EBPα、DKK1的蛋白表达（P<0.05）。结论：骨痹通消颗粒通过调控Wnt/β-catenin/PPARγ信号通路，可有效改善在糖皮质激素环境下由PPARγ介导的间充质干细胞骨脂分化失衡现象，从而发挥治疗SANFH的作用。