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芪蒡糖肾方通过AMPK/SIRT3信号通路调控NLRP3炎症小体改善糖尿病肾病肾损伤的机制研究
徐睿;李文诗;孙家乐;吴燕升;郭小平;王琳;目的：基于AMPK/SIRT3信号通路探讨芪蒡糖肾方对糖尿病肾病（DKD）小鼠与HK2细胞的NLRP3炎症小体的改善作用。方法：（1）体内实验：60只C57BL/6J小鼠随机选取10只作为对照组（CON），剩余成功构建DKD模型后分为模型组（DKD）、芪蒡糖肾方低剂量组（QBTS-L）、芪蒡糖肾方中剂量组（QBTS-M）、芪蒡糖肾方高剂量组（QBTS-H）、达格列净组（DAPA），连续灌胃给药治疗12周。实验结束后，收集小鼠肾脏，H&E、PAS、Masson染色观察肾组织形态学变化；透射电镜观察肾组织超微结构变化；免疫组化检测NLRP3表达水平；Western blot检测肾组织SIRT3、AMPK、P-AMPK、NLRP3、ASC、Caspase1表达水平；ELISA法检测小鼠血清IL-1β、IL-18含量。（2）体外实验：体外采用高糖刺激HK2细胞，将其分为正常组（NG， 5.6 mmol/L glucose）、高糖组（HG，30 mmol /L glucose）、芪蒡糖肾方组（QBTS，30 mmol /L glucose+QBTS，2 mg/mL）、达格列净组（DAPA，20 μmmol/L）。Western blot检测细胞内SIRT3、AMPK、P-AMPK、NLRP3、ASC、Caspase1表达水平；免疫荧光检测SIRT3、NLRP3荧光强度。结果：（1）体内实验：与CON组相比，DKD小鼠肾脏系膜细胞和基质增多，胶原纤维沉积明显增加，肾小球体积扩大，线粒体脊断裂，边界模糊；IL-1β、IL-18、NLRP3、Caspase1、ASC含量显著上升，SIRT3、P-AMPK/AMPK含量显著下降（P<0.05）。与DKD组相比，芪蒡糖肾方干预后，上述病理损伤显著改善，IL-1β、IL-18、NLRP3、Caspase 1、ASC含量显著下降，SIRT3、P-AMPK/AMPK含量上升（P<0.05）。（2）体外实验：与NG组相比，HG组NLRP3、Caspase1、ASC含量显著上升，SIRT3、P-AMPK/AMPK含量显著下降（P<0.05）；与HG组相比，QBTS组NLRP3、Caspase1、ASC含量显著下降，SIRT3、P-AMPK/AMPK含量显著上升（P<0.05）。结论：芪蒡糖肾方可以有效抑制DKD中NLRP3炎症小体生成，其保护作用可能与调节AMPK/SIRT3信号通路相关蛋白表达有关。
USP7通过增强Notch1蛋白稳定性促进结肠癌增殖、迁移过程
周雅娟;刘晓东;尹茂续;刘新辰;武艳;杨丽娟;目的：探讨USP7/Notch1/Hes-1信号轴对实体瘤CRC的增殖，迁移影响的具体机制。方法：通过ENCORI（Encyclopedia of RNA Interactomes）数据库（https://rnasysu. com/ encori）分析USP7、Notch1在结肠癌中的表达；通过GEPIA（Gene Expression Profiling Interactive Analysis）数据库(http://gepia. cancer.pku.cn/)分析USP7与Notch1的相关性；通过人类蛋白质图谱 (The human protein atlas，HPA)数据库分析结肠癌组织和正常结肠组织中USP7、Notch1的蛋白表达水平。STRING数据库构建USP7、Notch1蛋白互作网络；HDOCK进行蛋白-蛋白对接；免疫共沉淀(co-immunoprecipitation，Co-IP)实验验证USP7与Notch1的蛋白互作。建立过表达USP7细胞系，Western Blot检测Notch1及下游分子Hes-1的蛋白表达，IP验证过表达USP7后Notch1的泛素化水平；CCK8，平板克隆实验检测过表达USP7和同时敲低Notch1后结肠癌增殖能力变化，Western Blot检测Notch1，Hes-1的蛋白表达；划痕，Transwell实验检测结肠癌迁移能力变化，Western Blot检测Vimentin，E-cadherin的蛋白表达 结果：与正常组织（n=41）相比，USP7，Notch1在结肠癌组织（n=471）中显著高表达（P<0.01）；结肠癌组织中的USP7，Notch1蛋白表达水平高于正常结肠组织；且USP7与Notch1显著相关，USP7与Notch1存在相互作用；过表达USP7后，Notch1，Hes-1蛋白水平增加，Notch1的泛素化水平降低；过表达USP7后，结肠癌细胞克隆形成数目增加，迁移能力增强(P<0.05)；在过表达USP7基础上敲低Notch1后，细胞克隆数目减少，迁移能力降低(P<0.05)。结论：去泛素化酶USP7在结肠癌中高表达；USP7通过增强Notch1的蛋白稳定性从而影响结肠癌的增殖和迁移。
GABRP促进唾液腺腺样囊性癌细胞增殖、侵袭和迁移作用的研究
黄薇薇;田旭东;姜桃银;胡赟;目的：探索γ-氨基丁酸A型受体π亚基(Gamma-aminobutyric acid type A receptor pi subunit，GABRP)基因在唾液腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinoma，SACC）中的表达及其对ACC-M细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法：采用免疫组化方法检测GABRP在SACC及癌旁正常组织中的表达情况，结合患者临床特征进行相关性分析；利用小干扰RNA技术敲低GABRP表达，CCK8法、EdU法、划痕试验、Transwell小室实验检测敲低GABRP对ACC-M细胞增殖、迁移和侵袭的影响；Western blot实验检测敲低GABRP后ACC-M细胞中MEK/ERK信号通路相关蛋白表达变化。结果：癌组织内GABRP阳性表达率高于癌旁组织，GABRP在SACC组织中的表达与神经浸润密切相关；敲低GABRP后ACC-M细胞增殖、迁移和侵袭能力均受到明显抑制；敲低GABRP后MEK/ERK信号通路关键蛋白p-MEK、p-ERK表达水平下降。结论：GABRP在SACC组织中高表达，敲低GABRP可抑制ACC-M细胞增殖、迁移和侵袭能力，其作用机制可能通过调控MEK/ERK信号通路。
基于p38MAPK/ERK信号通路探讨积雪草苷对糖尿病心肌病的机制研究
刘乐强;徐梦文;纪佳慧;李馨月;崔乐妹;陈睿旸;朱小翌;孙红燕;卢国庆;唐碧;康品方;目的：研究积雪草苷(asiaticoside，AS)通过抑制p38MAPK/ERK信号通路对糖尿病心肌细胞凋亡的影响。方法：采取高糖高脂饮食联合STZ构建Ⅱ型糖尿病模型，将40只C57BL/6J小鼠随机平均分为对照组(Con)、糖尿病组(DM)、糖尿病+AS低剂量干预组(DM+AS-20，20 mg·kg-1·d-1)和糖尿病+AS低剂量干预组(DM+AS-40，40 mg·kg-1·d-1)，成模后，通过彩超测量左心功能，HE染色检测心脏形态学变化，Elisa检测血清胰岛素(insulin，INS)和胆固醇(cholesterol，CH)水平，采用Western blotting法检测心脏组织中Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、p38MAPK、p-p38MAPK、ERK和p-ERK的蛋白水平。利用高糖干预H9C2心肌细胞构建体外模型，设置对照组(Con)、高糖干预组(HG)、高糖+AS低剂量干预组(HA1， 40 μmol/L)和高糖+AS高剂量干预组(HA2， 80 μmol/L)。Western blotting检测各组的p38MAPK/ERK通路和凋亡相关蛋白表达情况。结果：与Con组相比，DM组体质量下降、空腹血糖升高、血清INS水平降低、CH水平升高(P<0.001)；小鼠左心的收缩和舒张功能下降(P<0.001)；AS治疗后，小鼠的体质量升高，血糖下降，血清INS水平升高、CH水平下降(P<0.05)；AS可改善左心功能(P<0.05)。Western blotting结果提示，DM和HG组的Bcl-2蛋白表达降低，Bax、Cleaved Caspase-3、p-p38MAPK和p-ERK蛋白表达升高(P<0.01)。在AS干预后，Bcl-2蛋白表达升高，Bax、Cleaved Caspase-3、p-p38MAPK和p-ERK蛋白表达降低(P<0.05)。结论：AS通过改善糖脂代谢紊乱和抑制心肌异常凋亡，进而治疗糖尿病心肌病，其机制可能与抑制p38MAPK和ERK通路有关。
范可尼贫血互补群D2基因在人胸膜间皮瘤中的表达及临床意义
赵丹;李正亮;杨文仲;李锦松;王小忆;张国美;熊伟;目的：胸膜间皮瘤（pleural mesothelioma， PM）是一种起源于胸膜脏层的难治性癌症，本文旨在探讨范可尼贫血互补群D2 (fanconi anemia complementation group D2， FANCD2)基因在PM中的表达水平及敲低FANCD2基因对PM细胞NCI-H2052增殖和迁移的影响。方法：应用癌症基因组图谱（the cancer genome atlas， TCGA）数据库下载PM基因表达数据，临床病理数据与生存状态数据；使用R语言，Perl软件等程序包作FANCD2在PM中的差异分析、临床病理相关性分析、COX单因素和多因素分析、免疫浸润分析以及基因富集分析。采用 qRT-PCR 和 WB 检测间皮瘤细胞中 FANCD2基因的表达水平。通过 CCK-8、克隆形成实验、划痕实验及细胞周期检测评估敲低FANCD2 对PM细胞NCI-H2052增殖与迁移能力的影响。结果：生信分析和体外细胞学实验结果均表明，与正常对照组织和人正常间皮细胞Met-5A相比，不同类型的PM组织和PM细胞中FANCD2基因均呈显著高表达（P<0.001）；FANCD2表达量与PM 肿瘤分期具有显著相关性（P＜0.05）；FANCD2基因高表达与PM患者预后不良成正相关（P＜0.001）；FANCD2基因高表达与PM中M2巨噬细胞等浸润水平呈正相关（P＜0.05），并在细胞周期、卵母细胞减数分裂、细胞衰老等通路显著富集。在PM细胞NCI-H2052中通过siRNA敲低FANCD2基因表达能导致细胞周期G1/S期阻滞，并显著抑制PM细胞增殖和迁移。结论：FANCD2在PM组织中高表达，是判断PM预后的良好指标之一，敲低FANCD2基因表达能导致细胞周期G1/S期阻滞，并显著抑制PM细胞增殖和迁移。
AGEs介导RAGE/NF-κB信号轴调控糖尿病牙周炎的作用机制与靶向治疗研究进展
周洁;夏文轩;郭竹玲;糖尿病与牙周炎之间存在显著的双向病理关联，其核心机制涉及晚期糖基化终末产物AGEs与受体RAGE轴介导的炎症-氧化应激-免疫调控网络异常激活。糖尿病的高糖微环境加速AGEs生成，通过RAGE激活NF-κB信号通路，诱导促炎因子和活性氧的级联释放，同时抑制成骨细胞活性并促进破骨细胞分化，导致牙槽骨吸收加剧。牙周致病菌及其毒力因子进一步通过TLR/NLR受体激活固有免疫，靶向AGEs-RAGE轴的治疗策略展现出潜力，但仍面临检测技术局限、药物特异性不足及代谢记忆等挑战。未来需整合多靶点干预与精准医学，以突破临床转化瓶颈。
圣和散对人胶质母细胞瘤 U251 细胞的放疗敏感性的影响
陈媛;岳小楠;王腾岳;赵铭岳;卢长青;王欢;樊凯芳;目的：探究圣和散（SHP）对人胶质母细胞瘤 U251 细胞的放疗敏感性的影响。方法：选取人恶性胶质瘤 U251 细胞株作为研究对象，分组如下：对照组、SHP组、5Gy组、5Gy+SHP组、自噬抑制剂（5Gy+3-MA）组、5Gy+SHP+3-MA组。采用 CCK-8、Edu、克隆形成实验、流式凋亡术、细胞成球实验、电镜、MDC 染色、Western blot实验检测。结果：CCK-8 实验结果显示细胞活力，SHP 组、5Gy 组和 5Gy+SHP 组较 Con 组降低（均P<0.01）；5Gy+SHP+3-MA 组较 5Gy+SHP 组显著上升（P<0.01）。Edu结果显示阳性细胞率，SHP 组、5Gy 组和 5Gy+SHP 组较 Con 组显著降低（P<0.01、P<0.05）；5Gy+SHP+3-MA 组较 5Gy+SHP 组显著上升（P<0.01）。细胞克隆实验显示细胞克隆数目，SHP 组、5Gy 组和 5Gy+SHP 组较 Con 组都有减少（P<0.01、P<0.05 、P<0.001）。流式检测结果显示细胞凋亡率，SHP 组、5Gy 组和 5Gy+SHP 组较 Con 组明显增长（P<0.01、P<0.05）；5Gy+SHP+3-MA 组较 5Gy+SHP 组显著下降（P<0.001）。干细胞成球结果显示干细胞成球数量，与 Con 组相比，SHP 组、5Gy 组和 5Gy+SHP 组较 Con 组明显减少（P<0.05）；5Gy+SHP+3-MA 组较 5Gy+SHP 组显著增加（P<0.01）。通过投射电镜、MDC 染色结果显示 5Gy+SHP 组细胞的自噬溶酶体形成较多于 SHP 组与 5Gy 组，且更多于 Con 组。Western blot 结果显示：5Gy+SHP 组细胞 Cleaved-caspase3、Beclin 1和 LC3Ⅱ/Ⅰ 的蛋白表达量明显高于 SHP 组与 5Gy 组（均P<0.01）；5Gy+SHP+3-MA 组较5Gy+SHP 组相比 Cleaved-caspase3、Beclin 1和 LC3Ⅱ/Ⅰ 的蛋白表达量有所降低（P<0.01）。结论：SHP 可增强人胶质母细胞瘤 U251 细胞自噬，自噬抑制剂能逆转 SHP 诱导的放疗增敏效应，提示 SHP 通过自噬途径增强 U251 细胞放疗敏感性。
双层探测器光谱CT在肝细胞癌病灶检出及血供监测中的应用研究
林秀艳;于丽娟;王玉君;龚伟;目的：探讨双层探测器光谱CT多参数图像在肝细胞癌病灶检出及血供监测中的价值。方法：收集2023年8月～2024年12月期间在海南省肿瘤医院行光谱CT检查的80例肝细胞癌患者的影像和临床资料。采用客观评价指标，包括信噪比（SNR）、对比噪声比 （CNR），及主观评分法，对常规CT和40～120 keV虚拟单能级图的图像质量进行差异性分析，以MRI作为金标准，对常规CT、光谱多参数CT的病灶检出数量进行多元线性回归分析；分别计算常规CT和光谱多参数CT在血供判断中的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和符合率， P<0.05即存在显著性差异。结果：常规CT组与虚拟单能级组（40、50、60、70、120 keV）的SNR值、CNR值、主观评分存在显著差异（F=19.857，P<0.001；F=38.236，P<0.001；F=154.564，P<0.001），其中以40 keV和50 keV显著性较高，随着能级的升高，SNR值、CNR值、主观评分随之下降。40 keV、50 keV单能量图像是肝癌病灶检出的重要因子（β=1.103，t=33.934，P<0.001），回归系数分别为B=1.122（95% CI：1.057～1.188）、B=0.928（95% CI：0.808～1.049）。碘浓度测量判断肝癌病灶血供的敏感性为98.68%（75/76）、阳性预测值为97.4（75/77），符合率为96.25（77/80）。结论：40 keV和50 keV单能级图的图像质量明显高于常规CT，有较高的病灶检出能力；相较于视觉判断和CT值测量，碘浓度测量在血供监测中的具有较高的诊断效能。
四逆散对自身免疫甲状腺炎小鼠Th17/Treg平衡的调控机制
谭智英;杜立娟;贾在金;薛海波;刘俊香;郝梅菊;毛真真;贾建营;叶蕾;李杰;目的：基于Th17/Treg细胞平衡探讨四逆散治疗实验性自身免疫甲状腺炎小鼠（EAT）的作用机制。方法：将30只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、硒酵母组（26 μg/kg）、四逆散低剂量组（3.89 g/kg）、四逆散高剂量组（15.6 g/kg）。除对照组外，其余小鼠通过高碘水（NaI）喂养和皮下多点注射含有弗氏佐剂的猪甲状腺免疫球蛋白（PTg）构建EAT模型。模型构建成功后，硒酵母组及四逆散各组根据体重给予相应剂量的药物灌胃，正常组及模型组每日给予等体积的蒸馏水灌胃，连续干预6周后，HE染色检测甲状腺组织炎症程度；免疫组化检测甲状腺组织RORγt、FOXP3蛋白表达；ELISA检测小鼠血清中TPOAb、TGAb、IL-17A、IL-6、TGF-β、IL-10的水平；流式细胞术检测各组小鼠脾脏SMCS中Th17和Treg的比例变化；Western blot检测各组小鼠脾脏STAT3、p-STAT3、STAT5、p-STAT5、FOXP3、RORγt的表达。结果：与模型组小鼠相比，四逆散治疗组小鼠甲状腺结构破坏及淋巴细胞浸润程度减轻；甲状腺组织中RORγt表达显著下降（P<0.05）、FOXP3表达显著升高（P<0.05）；血清中TPOAb、TGAb水平显著下降（P<0.0001，P<0.05）；IL-6、IL-17A、TGF-β水平显著下降（P<0.0001，P<0.05，P<0.01）；IL-10浓度水平显著升高（P<0.0001）；Th17/Treg细胞比例显著下降（P<0.001）；p-STAT3/STAT3、RORγt蛋白表达显著降低（P<0.05）；p-STAT5/STAT5、FOXP3蛋白表达升高（P<0.05，P<0.01）。结论：四逆散能显著减轻EAT小鼠的炎症反应，其机制可能与恢复Th17/Treg细胞平衡有关。
HSP90/MLKL/PGAM5/DRP1通路调控线粒体动力学抗VaD的作用研究
朱小敏;陈炜;卓桂锋;符钰岚;劳祎林;黄颖睿;袁炳茂;吴林;目的：探讨HSP90/MLKL/PGAM5/DRP1通路通过调节线粒体动力学平衡在血管性痴呆（vascular dementia， VaD）中的神经保护机制。方法：采用随机数字表法将SD大鼠分组为假手术对照组、模型组及HSP90抑制剂干预组，每组9只。通过Morris水迷宫定位航行实验系统评估大鼠空间学习记忆能力，结合HE染色技术观察海马CA1区神经元形态学改变，应用ELISA法血清肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor-alpha，TNF-α）、白细胞介素-10（Interleukin-10，IL-10）水平。Western blot检测海马组织HSP90/MLKL/PGAM5/DRP1通路相关蛋白、ATP合酶α亚基（ATP5A）、融合蛋白1（MFN1）、融合蛋白2（MFN2）表达。免疫组化检测p-MLKL阳性表达。结果：与假手术组相比，模型组大鼠逃避潜伏期明显延长，穿越平台次数显著降减少，海马组织呈现明显神经元损伤；血清TNF-α水平升高，IL-10水平降低（P＜0.05）；海马组织HSP90、PGAM5蛋白水平、p-MLKL/MLKL比值、p-DRP1(ser616)/DRP1比值增加，ATP5A、MFN1、MFN2蛋白水平下降；同时p-MLKL阳性细胞数显著增加（P＜0.05）。经HSP90抑制剂干预后，上述指标均能显著逆转（P＜0.05），海马组织病理损伤减轻，学习记忆能力明显改善。结论：通过抑制HSP90/MLKL/PGAM5/DRP1信号通路，可减少VaD大鼠线粒体过度分裂，维持线粒体动力学平衡，抑制神经炎症并改善认知功能，为VaD治疗提供新靶点。