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海南岛2022-2023年住院儿童急性呼吸道感染中人偏肺病毒的分子流行病学与临床特征分析
唐程;常猛;肖美芳;彭箬岩;王高玉;胡小媛;黄艺;唐川宁;林大川;陈福和;靳妍;尹飞飞;目的：系统阐明2022年至2023年期间海南岛住院急性呼吸道感染（acute respiratory tract infections， ARTI）儿童中人偏肺病毒（human metapneumovirus， HMPV）的流行病学特征，探讨HMPV的感染率、流行规律、单一感染与混合感染情况、临床表现及影响重症转归的相关危险因素，评估新冠动态清零政策对HMPV流行特征的影响，为制定精准防控策略提供科学依据。方法：2022年1月至2023年12月，于海南省妇女儿童医学中心收集收治的15 182例住院ARTIs儿童患者作为研究对象，采用靶向高通量测序技术（tNGS）进行HMPV感染检测，并对31例HMPV阳性样本的融合蛋白F进行部分测序以确定病毒基因型别。结果：本研究共检出1 072例HMPV阳性病例，检出率为7.06%，其中3-7岁年龄组儿童感染率最高。2023年HMPV感染率（6.75%）低于2022年（7.67%）。值得注意的是，2023年流行高峰出现在秋季，与2022年春季的流行高峰形成鲜明对比，这一季节性分布特征的转变提示HMPV流行模式发生重要变化。共感染其他呼吸道病原体与患者重症的发生率无显著相关性。系统进化分析鉴定出B1、B2、A2c和A2b 4种基因亚型：2022年5月出现主要流行株更替现象，A2c亚型取代B亚型成为优势菌株；至2023年，A2c亚型已发展成为绝对优势流行株，这一演变趋势表明HMPV优势菌株呈动态演替。结论：海南岛HMPV呈现亚型动态演替和季节性流行高峰转移趋势，强调持续监测及针对高风险人群的精准防控策略的必要性。
基于网络药理学及实验探讨华蟾毒精改善线粒体功能逆转肝纤维化机制研究
秦霈瑶;李帛珈;马伊笛;张哲;付殷;付强;胡晓阳;目的：基于网络药理学、分子对接、分子动力学模拟及动物实验，探究基于线粒体功能调控肝纤维化的机制及并筛选相关天然活性成分。方法：基于肝纤维化数据集GSE162694筛选差异基因，构建肝纤维化与线粒体交集基因蛋白互作网络（PPI）和GO、KEGG富集分析。运用CMap clue平台，计算潜在天然活性成分，herb数据库检索其归属中药。通过分子对接和分子动力学模拟验证结合特性。建立CCL4诱导的C57BL/6小鼠肝纤维化模型，通过对肝组织进行HE、Masson染色，检测小鼠血清中ALT、AST、HA、LN、PCⅢ含量及肝组织中线粒体呼吸链复合物I和活性氧（ROS）含量，检测蛋白α-SMA、Collagen I和线粒体相关基因ETFB的表达水平，评估华蟾毒精对肝纤维化及线粒体功能的影响。结果：鉴定出共118个线粒体-肝纤维化相关基因，主要涉及线粒体转运等生物过程和非酒精性脂肪性肝病等信号通路。基于线粒体功能逆转肝纤维化的天然活性成分包括原海葱甙A、华蟾毒精、筒箭毒碱等。分子对接结果及分子动力学模拟发现ETFB-华蟾毒精组结合最紧密。动物实验显示模型组小鼠纤维化明显，而华蟾毒精组胶原纤维堆积减少，肝细胞结构趋于正常；华蟾毒精组相较模型组ALT、AST、HA、LN、PCⅢ含量降低且线粒体呼吸链复合物I含量上升，ROS含量降低，α-SMA、Collagen I、ETFB蛋白含量降低。结论：线粒体功能相关基因ETFB等可能是逆转肝纤维化的关键基因，华蟾毒精可通过降低ROS含量和ETFB基因表达从而改善线粒体功能，逆转肝纤维化。
加味薏苡附子败酱散对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜微循环障碍改善作用的研究
何志成;陈江;李文晓;张露蓉;梁国强;江星星;韦永娜;周琴;目的：探讨加味薏苡附子败酱散对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的溃疡性结肠炎（UC）模型大鼠肠黏膜微循环障碍的改善作用。方法：60只SPF级大鼠随机分为空白组、模型组、美沙拉秦组及加味薏苡附子败酱散低、中、高剂量组，除空白组外各组大鼠予3% DSS造模，成功建立UC模型后，美沙拉秦组及各剂量中药组分别予相应药物灌胃，空白组、模型组予等量生理盐水灌胃。HE染色观察各组结肠组织病理变化，血液流变仪检测血液流变学参数，ELISA检测大鼠血清P-选择素、TXB2和6-Keto-PGF1α含量，透射电镜观察肠黏膜微血管超微结构，MASSON染色观察微血管胶原纤维阳性面积比率，免疫组化法检测结肠组织VEGF表达、肠黏膜MVD。结果：与空白组相比，模型组结肠病理损伤显著，血液流变学参数、P-选择素、TXB2、VEGF、MVD表达水平显著升高（P＜0.05，P＜0.01），6-Keto-PGF1α表达水平显著降低（P＜0.01），微血管损伤显著，微血管胶原纤维阳性面积比率显著升高（P＜0.01）。与模型组相比，各给药组结肠病理损伤改善，血液流变学参数、P-选择素、TXB2、VEGF、MVD表达水平降低（P＜0.05，P＜0.01），6-Keto-PGF1α表达水平升高（P＜0.01），微血管损伤减轻，微血管胶原纤维阳性面积比率显著降低（P＜0.01），中药组中以高剂量组疗效最为显著。结论：加味薏苡附子败酱散可有效改善UC大鼠肠黏膜微循环障碍。
CircADAMTS-6调控AECOPD细胞模型抗病毒固有免疫的机制研究
秦会平;蔡晓瑜;黄斌;高枫;阳芳;王昌明;目的:探讨环状RNA circADAMTS-6通过调控miR-1260b/IFNAR2轴对慢性阻塞性肺疾病急性加重（AECOPD）细胞模型抗病毒固有免疫防御反应的影响。方法:（1）香烟烟雾提取物（CSE）干预人支气管上皮细胞（BEAS-2B）建立COPD细胞模型，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测circADAMTS-6、miR-1260b、IFNAR2表达，免疫印迹（Western blots，WB）检测IFNAR2蛋白表达；（2）过表达circADAMTS-6的BEAS-2B经CSE+poly（dA:dT）干预建立AECOPD细胞模型，检测抗病毒固有免疫通路ISG15和CXCL10 mRNA表达及STAT1、STAT2磷酸化水平；（3）双荧光素酶报告基因检测circADAMTS-6、miR-1260b、IFNAR2之间的关系；（4）BEAS-2B细胞分别予过表达miR-1260b联合过表达IFNAR2、过表达IFNAR2联合小干扰circADAMTS-6，再经CSE+poly（dA:dT）干预，WB检测STAT1、STAT2磷酸化水平。结果:（1）COPD细胞模型circADAMTS-6、IFNAR2表达降低，miR-1260b表达升高（P<0.05）；（2）过表达circADAMTS-6促进AECOPD细胞模型ISG15和CXCL10 mRNA表达及STAT1、STAT2磷酸化（P<0.05）；（3）miR-1260b分别与circADAMTS-6及IFNAR2结合（P<0.05）；（4）过表达IFNAR2促进STAT1、STAT2磷酸化，联合过表达miR-1260b或沉默circADAMTS-6逆转IFNAR2过表达的促进作用（P<0.05）。结论:circADAMTS-6可能通过抑制miR-1260b促进IFNAR2表达，激活STAT1/2介导的抗病毒免疫通路，增强AECOPD细胞模型的抗病毒免疫防御。
基于MALDI-TOF-MS对地中海贫血和G6PD缺乏症热点突变的快速联检
韩语;陈宏健;韩燕媚;王文芳;石礼森;邢增文;符免艾;目的：基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（Matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry，简称MALDI-TOF-MS）平台建立单一反应体系中对常见地中海贫血（Thalassemia，简称地贫）和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（Glucose-6-phosphate dehydrogenase，简称G6PD）缺乏症基因热点突变联合检测方法，旨在快速准确联检两病。方法：纳入2021年至2024年于海口市妇幼保健院医学遗传科进行地贫和G6PD缺乏症检测基因突变的患者为研究对象，以海南人群地贫和G6PD缺乏症的热点突变（α-地贫：３种点突变；β-地贫：10种突变；G6PD：6种突变）为靶点，设计特异性聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction，简称PCR）引物扩增目的基因序列，并针对每个点突变设计核酸质谱单碱基延伸探针。以20例已知样本做为模板，多次验证多重PCR引物混合物和单碱基延伸探针的有效性和特异性，以及数次不断优化检测体系中PCR引物组分，构建基于MALDI-TOF-MS的地贫和G6PD缺乏症19个热点突变联合检测体系。并用此新的联检体系检测105例已知基因型样本评价其特异性和一致性。结果：采用20个已知基因型样本为模板，验证了多重PCR引物和单碱基延伸探针的特异性较好，成功建立了地贫和G6PD缺乏症19个突变热点联检的MALDI-TOF-MS检测新方法。105例已知基因型样本结果与常规方法检测结果一致，说明此法能对地贫和G6PD缺乏症的19个热点突变进行快速基因分型。结论：本研究建立了一种基于MALDI-TOF-MS的地贫和G6PD缺乏症基因分型新方法，实现可在1个反应孔中对地贫和G6PD缺乏症19个突变基因快速联合检测。此方法具有操作简便、成本低、高通量和高特异性等优点，有望成为地贫和G6PD缺乏症海南地区大规模人群预防性联合筛查的有效策略。
基于非靶向代谢组学和16Sr RNA测序探讨升降平喘止咳丸治疗支气管哮喘模型大鼠的作用机制
吴桐;赵思超;鲁宝堂;何腾飞;闫文瑞;王成娟;张常喜;目的：基于“肺与大肠相表里”的中医理论，通过非靶向代谢组学和肠道菌群分析，探讨升降平喘止咳丸治疗支气管哮喘大鼠的作用和机制。方法：选取40只SPF级大鼠进行实验，10只空白组，余30只用卵清蛋白腹腔注射和雾化激发造模，造模成功后分为模型组、阳性对照组、升降平喘止咳丸治疗组，观察大鼠一般情况，苏木素-伊红（HE）染色检测肺组织和大肠组织病理改变；酶联免疫吸附（ELISA）测定白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量；随机选取空白组、模型组、治疗组，每组6个样本进行超高效液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）分析差异代谢物和16Sr RNA测序检测肠道菌群变化，并将差异代谢物和菌群联合分析，发现潜在生物标记物。免疫组化（IHC）验证大鼠大肠组织中紧密连接蛋白（zonula occludens-1，ZO-1）、闭合蛋白（Occludin）表达；免疫印迹（WB）验证代谢通路中大鼠肺组织磷脂酰肌醇-3-激酶（Phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）、蛋白激酶B(Protein Kinase B，AKT）、p-PI3K、p-AKT蛋白的表达水平。结果：升降平喘止咳丸干预后减少了炎症细胞浸润，改善了肺和大肠组织的病理学结构、大鼠血清中的IL-6、TNF-α含量均下降、大肠组织中紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达升高、下调肺组织中P-PI3K/PI3K、P-AKT/AKT蛋白表达水平。在哮喘大鼠中肠道微生物失衡主要表现为厚壁菌门丰度高，拟杆菌门丰度低，药物干预后较模型组厚壁菌门丰度降低，拟杆菌门丰度升高，乳酸菌、双歧杆菌、异芽孢杆菌等有益菌增多，纠正肠道微生物的失衡。代谢组学研究发现，升降平喘止咳丸对BA大鼠的干预作用与丁酸盐、苯丙氨酸、鞘脂代谢、嘧啶代谢、乙醛酸和二羧酸、甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢有关。结论：升降平喘止咳丸通过调控丁酸代谢、组氨酸、嘧啶代谢等代谢途径及PI3K/AKT代谢通路纠正厚壁菌门和拟杆菌门失调，增加有益菌乳酸菌和双歧杆菌，减轻炎症反应发挥治疗支气管哮喘的作用。
苗医弩药针对膝骨性关节炎大鼠背根神经节 Nav1.7/Nav1.8通路的影响
杨心彧;王欣;李虹莹;卢春霞;崔瑾;目的：观察苗医弩药针对膝骨性关节炎（KOA）大鼠背根神经节（Dorsal root ganglion，DRG）电压门控钠通道1.7（Nav1.7）/1.8（Nav1.8）蛋白的影响，探讨弩药针治疗KOA的潜在机制。方法：36只雄性SD大鼠中随机抽取9只作为正常组。其余采用右膝关节注射碘乙酸钠制备KOA模型，造模成功后随机分为模型组、弩药针组、皮肤针组，每组各8只。弩药针组按照苗医弩药针的操作步骤于大鼠右膝关节面进行干预治疗，皮肤针组采用皮肤针于右膝关节进行局部滚刺。隔日1次，每周3次，连续干预4周。于实验第1、14、21、28、35、42天检测大鼠机械刺激的缩足阈值（von Frey阈值）。干预结束后，H&E染色法观察大鼠右膝关节软骨组织形态变化；ELISA法检测大鼠血清中降钙素基因相关肽（CGRP）、P物质（SP）和前列素E2（PGE2）的含量；Western blot法和实时荧光定量PCR法检测大鼠DRG组织中Nav1.7、Nav1.8蛋白和mRNA的相对表达量。结果：与正常组比，模型组大鼠实验第42天 von Frey 阈值显著降低（P<0.01）；右膝关节软骨表面糜烂缺损，结构层次紊乱，软骨细胞显著减少；血清中CGRP、SP、PGE2含量显著升高（P<0.05）；DRG组织中 Nav1.7、Nav1.8 蛋白和mRNA相对表达量显著升高（P<0.05，P<0.01）。与模型组比较，弩药针组、皮肤针组大鼠实验第42天von Frey阈值显著升高（P<0.01）；右膝关节软骨形态较完整，结构层次较清晰，新生软骨细胞较多；血清中CGRP、SP、PGE2含量显著降低（P<0.05）；DRG组织中Nav1.7、Nav1.8 蛋白和 mRNA 相对表达量显著降低（P<0.05，P<0.01）。与皮肤针组比较，弩药针组大鼠实验第42天von Frey 阈值显著升高（P<0.01）；右膝关节软骨表面光滑，结构层次清晰；血清中CGRP、SP、PGE2含量降低（P<0.05）；DRG组织中Nav1.7、Nav1.8 蛋白和mRNA相对表达量显著降低（P<0.05，P<0.01）。结论：苗医弩药针可能通过抑制炎性因子CGRP、SP、PGE2的表达，下调DRG上钠通道Nav1.7、Nav1.8表达，发挥治疗KOA作用。
泛素特异性蛋白酶18调控TAK1-NF-κB轴对动脉粥样硬化形成的影响
李松;黎文艺;夏冰;王杰;戴佳琳;目的：探讨泛素特异性蛋白酶18(Ubiquitin-specific proteases 18，USP18)通过调控TAK1-NF-κB轴影响动脉粥样硬化(AS)形成及潜在分子机制。方法：收集尸检确诊为冠心病的人体冠状动脉左前降支样本，根据管腔狭窄程度分为：轻度狭窄(狭窄率<50%)、中度狭窄(狭窄率50%～70%)和重度狭窄(狭窄率>70%)三组，每组各10例。免疫组化(IHC)和免疫印迹(Western blot)检测冠状动脉中USP18、Transforming growth factor-β activated kinase-1(TAK1)、phosphorylated TAK1 (p-TAK1)、Interleukin-1 beta(IL-1β)和Tumor necrosis factor-alpha(TNF-α)的表达水平。选用ApoE-/-小鼠，通过高脂饮食喂养16周诱导AS模型。将小鼠随机分为三组(每组n=5)：高脂饮食对照组(HFD)、腺病毒对照组(Ad-NC)和USP18基因敲除组(Ad-USP18)。分离主动脉，通过以下染色定量分析：使用苏木精-伊红染色、马松三色染色和油红O染色评估斑块面积与血管结构、胶原纤维含量和脂质沉积。此外，通过Western blot量化主动脉组织中USP18、TAK1、p-TAK1、IκBα、p65、p-p65、IL-1β和TNF-α的表达水平。结果: IHC和Western blot印迹分析的结果表明，随着冠状动脉狭窄程度的增加，USP18蛋白在人冠状动脉中的表达水平显著下降(P<0.05)。相反，在不同组别的人冠状动脉中，TAK1蛋白的表达水平没有显著差异(P>0.05)，然而，p-TAK1蛋白的表达水平随着冠状动脉狭窄程度的增加而显著上升(P<0.05)。此外，中度和重度狭窄患者冠状动脉中IL-1β和TNF-α蛋白的表达水平显著增加(P<0.05)。在动物实验中：与HFD组和Ad-NC组相比，Ad-USP18组小鼠的主动脉斑块负荷、胶原纤维含量和脂质沉积增加(P<0.01)。Western blot结果显示，USP18敲低导致p-TAK1、p-p65、IL-1β和TNF-α蛋白表达水平升高(P<0.05)，同时主动脉中IκBα的表达水平降低(P<0.05)。结论：USP18可能通过与TAK1相互作用并随后导致TAK1去泛素化，抑制NF-κB信号通路、减少泡沫细胞的形成和炎症因子释放，从而发挥抗AS的作用。
基于网络药理学及实验验证探讨肾衰泄浊汤治疗Ⅳ型心肾综合征的作用机制
袁文萋;周坤城;卢姚宏;刘庚鑫;张格第;黄辰杰;晏子友;目的: 运用网络药理学技术，探讨肾衰泄浊汤治疗Ⅳ型心肾综合征（TypeⅣ cardiorenalsyndrome，TypeⅣCRS）的作用机制，并通过动物实验进行验证。方法:通过TCMSP与BATMAN-TCM数据库筛选肾衰泄浊汤的活性成分及其潜在作用靶点；收集TypeⅣCRS相关靶点；借助Venny2.1获取交集基因，将其导入STRING数据库构建PPI网络，并通过CytoNCA插件筛选核心靶点，采用DAVID数据库进行GO注释及KEGG通路富集分析。利用AutoDOCK1.5.7软件对活性成分与核心靶点进行分子对接验证。实验通过5/6肾切除制备Ⅳ型CRS大鼠模型，予以肾衰泄浊汤干预后，取肾脏及心肌组织行H&E与Masson染色，观察病理变化；采用QT-PCR检测心肌中IL-6、TNF mRNA的表达情况；采用蛋白质印迹法检测心肌组织中IL-17、TRAF6、P-p65等蛋白表达情况。结果：共筛选出肾衰泄浊汤的活性成分489个；与TypeⅣCRS相关的潜在靶点1 891个，其中IL-6、TNF、RELA、NFκB1等可能为关键靶点；KEGG通路分析显示，主要富集于Lipid and atherosclerosis、Fluid shear stress and atherosclerosis、IL-17信号通路等。动物实验证实，肾衰泄浊汤可明显减轻Ⅳ型CRS大鼠肾心组织损伤，改善病理形态，并抑制IL-17/NFκB信号通路，显著下调心肌组织中IL-6、TNF的mRNA表达及IL-17、P-p65、TRAF6等蛋白表达水平，差异具有统计学意义（P<0.001）。结论：肾衰泄浊汤可能通过调控炎症反应、脂质代谢，抑制IL-17/NFκB信号通路，发挥治疗Type Ⅳ CRS的作用，从而减轻大鼠肾心组织的炎症损害，改善肾心功能。
1990-2021年中国归因于烟草的慢性阻塞性肺疾病的疾病负担及其年龄-时期-队列模型分析
张东献;林哲;耿修来;邹金婷;陶俊良;目的 本研究旨在探讨1990-2021年间中国不同性别、年龄人群归因于烟草暴露的慢性阻塞性肺疾病的疾病负担及变化趋势，为制定针对性干预策略提供科学依据。方法 采用2021年全球疾病负担研究（GBD 2021）中患者的死亡数据，运用Joinpoint回归模型来分析其死亡率、伤残调整寿命年（DALY）及标化率的变化趋势和平均年度变化百分比（AAPC），并结合年龄-时期-出生队列模型分析中国不同性别和年龄层人群COPD的死亡率与年龄、时期和出生队列等指标之间的关联强度。结果 1990-2021年间，中国各年龄层人群的COPD死亡率总体呈下降趋势（AAPC =-3.69%，P <0.05），男性和女性年平均变化率分别为-3.23%和-4.21%；中国归因于烟草的COPD死亡病例数从1990年的124.4万增长至2021年的128.5万，死亡率从1990年52.64/10万下降至2021年的44.75/10万，标准化死亡率从1990年111.74/10万下降至2021年的35.46/10万；归因于烟草的COPD伤残调整寿命年从1990年的1 102.34万人年降至2021年的815.02万人年，标化DALY从1990年的1 884.73/10万人年下降至2021年的589.75/10万人年。年龄-时期-出生队列模型分析结果显示，1990-2021年中国归因于烟草的COPD死亡风险随年龄增长呈上升趋势；死亡风险随着年份的增加呈缓慢下降趋势。结论 1990-2021年中国归因于烟草的COPD疾病负担整体呈下降趋势，但受社会老龄化问题影响，在男性和65岁以上的重点人群中观察到更高的疾病负担。我国应更加关注中老年男性群体，并持续实施更具针对性的防控和干预政策。