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重组旋毛虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂在脓毒症急性肝损伤治疗中的研究
杨立春;周情毅;蒲传航;严华悦;王胜威;汪雨姝;成浩源;胡小冬;褚亮;目的：探讨重组旋毛虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂（rTS-Cys）在脓毒症急性肝损伤治疗中的潜在作用。方法：雄性C57BL/6小鼠随机分为7组(n=10)（Sham组、CLP组、CLP+ rTS-Cys组（包括10、20、30、40 μg四组）、CLP+ DEX组）。CLP和CLP+ rTS-Cys组采取盲肠结扎穿孔法建立小鼠脓毒症急性肝损伤小鼠模型，Sham组行开腹后不做其他处理，立即缝合关腹。术后1 h，CLP组腹腔注射100 μL PBS，CLP+ rTS-Cys组腹腔注射含不同剂量rTS-Cys的100 μL PBS，CLP+DEX组使用等量的地塞米松药物。24 h后，处死小鼠，通过HE染色评价肝脏病理变化；ELISA法检测血清中TNF-α、IL-6、IL-10、TGF-β的表达水平；于全自动生化分析仪检测血清中ALT和AST水平；采用Western blot法检测NF?κB/MAPK信号通路蛋白的表达情况。结果：生存分析提示rTS-Cys 能提高脓毒症小鼠的存活率。HE染色结果显示CLP组肝组织结构紊乱和炎症细胞浸润，CLP+ rTS-Cys和CLP+DEX组小鼠肝组织较CLP组病理损伤减轻，炎症细胞浸润明显减少；ELISA结果显示小鼠血清TNF-α、IL-6水平比较：CLP组较Sham组明显升高，CLP+ rTS-Cys和CLP+DEX组较CLP组降低；IL-10、TGF-β水平比较：CLP组较Sham组升高，CLP+ rTS-Cys和CLP+DEX组较CLP组升高；肝功能分析ALT和AST结果显示CLP组较Sham组显著升高，CLP+ rTS-Cys和CLP+DEX组较CLP组降低。Western blot结果显示CLP组NF?κB/MAPK信号通路蛋白表达量上调，CLP+ rTS-Cys组的该通路表达较CLP组下调。结论：rTS-Cys可通过下调NF?κB/MAPK信号通路抑制促炎细胞因子的表达并促进调节性细胞因子的表达，进而保护脓毒症诱发的急性肝损伤。
蒙药照山白抗肺纤维化的作用研究
赵雪莲;白金亮;红艳;辛颖;目的 通过比较不同剂量博来霉素（Bleomycin，BLM）经气管自主吸入对肺纤维化模型大鼠的影响，最终选定最优的造模方法。来探讨蒙药照山白对博来霉素诱导的大鼠肺纤维化的干预效应研究。方法 1. 取SPF级21只SD雄性大鼠，随机分为3组，空白对照组、BLM-3（3mg/kg）和BLM-5（5mg/kg）每组7只。造模后记录大鼠的体质量并且观察生存状况，于第21天取材计算肺系数，系统的测定比较各组大鼠血清细胞中羟脯氨酸（hydroxyproline，HYP）、白细胞介素6（IL-6）、转化生长因子β1（TGF-β1）和超氧化物歧化酶（SOD）的含量，采用组织病理学双染色（HE/Masson）观察各组病理学的改变。2. 取SPF级35只SD雄性大鼠，随机分为正常组、模型组、醋酸泼尼松组（5mg/kg）、ZSB-D（135mg/kg）和ZSB-G（270mg/kg）。采用前期实验更优的造模方法建立肺纤维化大鼠模型，造模后第3天开始给药，观察造模前及给药3、7、14、21天各组大鼠的生存状况及体质量变化。21天取材后计算大鼠肺系数，根据试剂盒的方法测定血清中HYP、IL-6、TGF-β1、SOD、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、I型胶原蛋白(Col I)和纤连蛋白（FN）的表达水平。采用组织病理学双染色（HE/Masson）观察各组病理学的改变。结果 1. 经气管吸入3mg/kg与5mg/kg的BLM均可诱导大鼠产生肺纤维化，综合存活率、血清指标、肺组织病理改变等各项指标，BLM致肺纤维化的适宜剂量为3mg/kg。2. 与模型组相比，蒙药照山白和醋酸泼尼松均可改善BLM导致的大鼠肺纤维化，降低肺系数和血清中IL-6、TGF-β1、TNF-α、Col I、FN和HYP等各指标的含量，上调SOD的表达水平均（P<0.05）。结论 蒙药照山白具有抗肺纤维化的作用，表明蒙药照山白可能通过"抗炎-抗氧化-抗纤维化"多靶点协同作用发挥治疗作用。
靶向抑制KDM1A调控肿瘤恶病质骨骼肌降解的作用机制研究
董伟;王菲;何美薇;黄志强;王宏伟;目的：探讨组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1A（KDM1A）在肿瘤恶病质骨骼肌降解中的调控作用及其分子机制。方法：构建肿瘤恶病质小鼠模型与C2C12肌管细胞模型，随机分为4组：正常组（NC）、正常给药组(NC+KDM1Ai)、恶病质组(CC)、恶病质给药组(CC+KDM1Ai)。通过RNA测序与生物信息学分析确定KDM1A对骨骼肌的关键调控功能。qPCR、Western blot、免疫荧光实验检测KDM1A、MuRF-1、Atrogin1表达水平。免疫荧光、苏木素-伊红（HE）染色实验评估小鼠骨骼肌纤维横截面积（CSA）和肌管细胞直径。Western blot实验检测STAT3、pYSTAT3、H3K4me1、H3K4me2、H3K9me1、H3K9me2表达水平深入探究KDM1A调控机制。结果：转录组数据分析显示KDM1A在肿瘤恶病质骨骼肌萎缩进程中发挥特异性功能。在小鼠与细胞肿瘤恶病质模型中，KDM1A、MuRF-1、Atrogin1的mRNA与蛋白表达水平均显著上调（P<0.05）。抑制KDM1A显著改善肿瘤恶病质小鼠体重下降速度，瘦体重、后肢肌肉重量、股四头肌重量、心脏重量和抓握力等指标（P<0.05）。在体内和体外实验中，抑制KDM1A后，小鼠肌纤维横截面积显著增大，肌管细胞直径显著增加，MuRF-1和Atrogin1的mRNA与蛋白水平表达水平均明显下调（P<0.05）。与恶病质组相比，恶病质给药组组蛋白H3K4me1、H3K9me1和H3K9me2修饰水平显著上调（P<0.05），组蛋白甲基修饰水平改善。抑制KDM1A后，磷酸化STAT3表达水平明显下调（P<0.05），STAT3信号通路被抑制。结论：KDM1A在肿瘤恶病质进程中表达上调并促进肌萎缩，抑制KDM1A对肿瘤恶病质骨骼肌降解起保护作用，组蛋白甲基化修饰水平的改善和STAT3信号通路的抑制是其发挥作用的可能机制。
lncRNA CASC2靶向miR-K11-3p调控内皮细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭
张静;彭靖淇;刘娜;房新志;目的：研究长链非编码RNA癌易感性候选基因2（Long non-coding RNA cancer susceptibility candidate 2，lncRNA CASC2）靶向miR-K11-3p调控人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）增殖、凋亡、迁移和侵袭的分子机制。方法：qPCR法检测lncRNA CASC2的表达水平；生物信息学预测lncRNA CASC2与miR-K11-3p的靶向关系；双荧光素酶实验及qPCR法加以验证；CCK-8实验检测细胞增殖水平；AnnexinV/ Propidium Iodide实验检测细胞凋亡率；细胞划痕实验检测细胞迁移能力；Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果：pcDNA-CASC2组CASC2的表达水平显著高于Control组及pcDNA3.1组（P<0.05）；lncRNA CASC2靶向负调控miR-K11-3p的表达（P<0.05）；lncRNA CASC2抑制细胞增殖、促进细胞凋亡、降低细胞迁移及侵袭能力（P<0.05）；而外源回补miR-K11-3p可逆转lncRNA CASC2对内皮细胞的作用（P<0.05）。结论：lncRNA CASC2通过下调miR-K11-3p的表达，可抑制HUVECs的增殖、迁移和侵袭，并促进细胞凋亡。
耻垢分枝杆菌中TetR/AcrR家族转录因子Ms0532介导的异烟肼抗药性机制
穆棚;朱晨;目的：研究结核分枝杆菌的模式菌株—耻垢分枝杆菌（Mycobacterium smegmatis）在异烟肼（INH）抗性中的转录调控机制。方法：在耻垢分枝杆菌中构建一个转录因子超表达文库；筛选出对INH抗性的TetR/AcrR家族转录调控蛋白Ms0532，并通过超表达Ms0532来评估其对细菌INH抗性的影响；进一步使用凝胶阻滞迁移实验（EMSA）验证Ms0532与其自身启动子的DNA结合活性；利用DNA足迹鉴定Ms0532识别靶启动子的保守序列；再次通过EMSA验证该保守序列在Ms0532与DNA结合过程中的关键作用。结果：Ms0532能够增强耻垢分枝杆菌对INH的抗性，并通过EMSA和DNA足迹鉴定Ms0532识别靶启动子的保守序列GGTGAGTGAGTACTCTCTCACC，且该保守序列是Ms0532与DNA结合的关键结合位点。结论：本研究揭示了Ms0532在耻垢分枝杆菌INH抗药性调控中的重要作用，为深入理解细菌药物抗性机制和开发新抗结核药物提供了理论依据。
宝心艾维西木口服液及其拆方对心肌梗死的保护作用研究
吴慢慢;李治建;杨美扬;尹强;陈畦;贾蓉蓉;张梓朔;冷锦鸿;霍仕霞;刘雯霞;目的 探讨宝心艾维西木口服液（Baoxin Aiweiximu Oral Solution，BAOS）对心肌梗死（Myocardial Infarction，MI）的保护作用并考察其配伍合理性。方法 将BAOS拆方分为君药、臣药和佐药，利用网络药理学方法获取BAOS及其拆方的化学成分，并预测其作用靶点和通路，对比数据，分析BAOS的作用机制和配伍规律。采用异丙肾上腺素（Isoprenaline，ISO）诱导小鼠MI，通过检测心肌组织病理学变化、血清生化指标等评价BAOS及拆方对MI的保护作用并验证网络药理学预测的机制。结果 BAOS中73个化合物作用于297个MI相关靶点和195条相关通路。君药组抗MI主要通过调控AGE-RAGE、IL-17、TNF、EGFR和Toll样受体等信号通路，臣药和佐药的加入增强了BAOS对PI3K/Akt等通路的调控作用。动物实验表明，BAOS可增强MI小鼠心功能，减少血清中心肌酶含量和梗死面积，改善心肌组织病理变化，抑制氧化应激和炎症反应，激活PI3K/Akt信号通路，且全方组效果比君药组明显。结论 BAOS对ISO诱导的MI有保护作用，其机制可能与调控PI3K/Akt信号通路有关。君-臣-佐配伍合理，臣药和佐药对君药起到协同增效的作用。
S100A8通过调控P38/MAPK通路对膀胱癌增殖、侵袭和迁移的影响
庞震;徐浩然;王勤章;欧阳松;背景 S100钙结合蛋白A8（S100A8）对膀胱癌增殖、侵袭和迁移中的作用尚未阐明。目的 探讨S100A8对膀胱癌增殖、侵袭和迁移中的影响及作用机制。方法 通过TCGA数据库、HPA数据库及石河子大学第一附属医院泌尿外科的膀胱癌患者数据探究S100A8在膀胱癌中的表达情况。选用CCLE数据库筛选的S100A8表达较高的膀胱癌细胞系HT-1376以及人正常尿路上皮细胞株SV-HUC-1，Westernblot法（WB）与qRT-PCR实验验证其表达情况。后取HT-1376细胞分KD组，NC组，OE组及正常组，对其进行敲低和过表达的慢病毒转染，WB与qRT-PCR实验检测其转染效率。CCK-8法与EdU增殖实验检测各组细胞增殖；划痕实验与Transwell实验检测各组细胞迁移与侵袭；WB实验检测各组细胞中P38MAPK及pP38MAPK的表达水平。结果 S100A8在多种癌症高表达，S100A8高表达与膀胱癌患者不良预后相关；与人正常尿路上皮细胞株SV-HUC-1相比，膀胱癌细胞系HT-1376中S100A8蛋白与mRNA均高表达；KD组中S100A8蛋白表达水平、24、48h的OD450值、新生成细胞的比例、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、细胞中P38MAPK及pP38MAPK水平显著低于正常组及NC组（P<0.05），OE组中S100A8蛋白表达水平、24、48h的OD450值、新生成细胞的比例、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、细胞中P38MAPK及pP38MAPK水平显著高于正常组及NC组（P<0.05）。结论S100A8在膀胱癌细胞中高表达，S100A8通过调控P38MAPK通路影响膀胱癌的增殖、侵袭和迁移。
贵州小型猪T2DM气阴两虚证肝组织蛋白质组学研究
唐杰;邱华明;李子祥;朱竞雄;赵海;吴延军;吴曙光;目的：探讨2型糖尿病气阴两虚证的分子生物学机制及其潜在调控靶点。方法：采用高脂高糖饲料饲喂10个月，并结合破气伤阴药物干预3个月，构建贵州小型猪的2型糖尿病气阴两虚证模型。将模型分为模型组和正常组，分别采集肝脏组织，基于高通量蛋白质组学技术，通过对蛋白质提取、酶切、液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）及生物信息学算法，对样本实施全局性蛋白质定量分析，并鉴定具有统计学意义的差异表达蛋白。利用GO、KEGG、COG/KOG和STRING等数据库对差异蛋白进行功能注释和通路分析。结果：筛选出213个差异表达蛋白，其中158个蛋白下调，55个蛋白上调。GO和KEGG分析富集到13条相关通路，包括糖胺聚糖生物合成、精氨酸生物合成、基础转录因子、甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、胆汁分泌、神经活性配体-受体相互作用、细胞外基质-受体相互作用、类固醇激素生物合成、甘油磷脂代谢、半胱氨酸和蛋氨酸代谢、溶酶体、PI3K-Akt信号传导通路等。候选基因涉及脂质代谢（HMGCR、CYP7A1、SLC、AQP9、LPIN）、氨基酸代谢（ALDH18A1、ProDH、ARG、CBS、CTH）和信号传导（HSD17B2、SULT1E1、CD44、COL2A1、COL6A）结论：本研究揭示了2型糖尿病气阴两虚证的分子机制，为进一步探索该病症的生物标志物和治疗靶点提供了重要依据。
夏天无调控HIF1-VEGF-Notch通路改善VD模型大鼠学习记忆能力的实验研究
曹秀敏;胡小童;胡卓瑶;潘荣斌;李俊波;黄雄峰;陈乔;目的: 基于HIF1-VEGF-Notch通路探讨夏天无（Rhizomes of Corydalis Decumbens，RCD）改善血管性痴呆（Vascular Dementia，VD）模型大鼠学习记忆能力的可能作用机制。方法:运用改良双侧颈总动脉结扎（bilateral vessel occlusion，2-VO）法构建血管性痴呆大鼠模型，将SD（Sprague-Dawley，SD）大鼠随机分为假手术（Sham）组、模型（VD）组、尼莫地平（Nimodipine，Nim，0.01g/kg）组、夏天无低、中、高剂量组（RCD-L、RCD-M、RCD-H，剂量分别为0.2g/kg、0.4g/kg、0.8g/kg），每组14只，持续灌胃40d。通过Morris水迷宫实验检测学习记忆能力，尼氏染色观测神经元数量及形态变化，免疫组化观察微血管密度（Microvessel density，MVD）变化及血管内皮生长因子受体（Vascular Endothelial Growth Factor Receptor，VEGFR）的表达差异，Western blot检测缺氧诱导因子1α（Hypoxia Inducible Factor-1α，HIF-1α）、血管内皮生长因子（Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF）和跨膜受体蛋白Notch1（Notch homolog 1，Notch1）的蛋白表达水平。结果: 与Sham组相比，VD组大鼠平均逃避潜伏期明显延长（P<0.05，P<0.01），穿越平台次数明显减少（P<0.01）；CA1区锥体细胞坏死现象明显，数量呈极显著减少（P<0.01）；微血管密度增高（P<0.05），VEGFR蛋白表达水平显著升高（P<0.05）；脑组织HIF-1α、VEGF及Notch1蛋白含量均增高（P<0.05）。与VD组比较，各治疗组大鼠逃避潜伏期均不同程度缩短（P<0.05，P<0.01），穿越平台次数显著增多（P<0.05，P<0.01）；各治疗组神经元数量及微血管密度增高（P<0.05，P<0.01），VEGFR、HIF-1α、VEGF及Notch1蛋白表达水平明显提高（P<0.05，P<0.01）。结论: 夏天无在一定程度上能改善VD大鼠的认知障碍，增强学习记忆能力，其作用机制可能与其调节HIF1-VEGF-Notch信号通路，诱导脑组织血管新生，增加微血管密度，恢复血氧供应，修复神经元损伤有关。
紫朱软膏抑制PAD4介导的NETs形成促进糖尿病小鼠创面愈合的机制研究
孙健;游洋;樊炜静;袁美杰;王宏飞;柳国斌;目的 探讨紫朱软膏通过抑制PAD4介导的中性粒细胞胞外陷阱（NETs）从而促进糖尿病小鼠创面愈合中的作用机制。方法 采用糖尿病创面小鼠模型，将48只C57/BL6J雄性小鼠随机分为四组，包括正常创面组、糖尿病创面组、紫朱软膏治疗组及贝复济治疗组，每组12只。在不同时间点（0、3、7和14天）拍照记录创面愈合情况，并分析各组创面愈合率的差异。采用苏木素-伊红（HE）染色分析创面炎症细胞聚集情况；免疫荧光分析创面NETs分布；免疫印迹法（Westernblot）检测创面Cit-H3/H3比例；免疫组化法检测PAD4、NLRP3和IL-1β的蛋白表达；实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（RT-qPCR）法检测PAD4、NLRP3和IL-1β基因mRNA的表达水平。结果 糖尿病创面组创面愈合率明显低于正常创面组（P<0.01），紫朱软膏治疗组创面愈合率明显高于糖尿病创面组（P<0.01），且在第7天愈合效果优于贝复济治疗组（P<0.05）。紫朱软膏可抑制糖尿病小鼠创面炎症细胞聚集（P<0.01）及NETs的形成（P<0.01），降低PAD4、NLRP3和IL-1β的蛋白表达（P<0.01）和mRNA的水平（P<0.01）。结论 紫朱软膏可能通过抑制PAD4介导的NETs形成以及炎症因子NLRP3和IL-1β的释放，从而促进糖尿病小鼠创面愈合。